【细胞介绍】HepG2[HEPG2]是一种具有上皮样形态的细胞株，源自一名15岁阿根廷白人男性肝细胞癌患者的肝癌组织。这种细胞能够分泌多种血浆蛋白，包括清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原和铁传递蛋白等。HepG2细胞系由Wistar研究所提供，适合进行转染实验。其表达的标志物包括胰岛素及胰岛素样生长因子II（IGFII）。在生长特性方面，HepG2细胞呈现紧密连接、片状增殖的特点，最初附着在培养瓶壁上形成小岛状结构，后期可能出现多层堆积或悬浮状态。因其良好的贴壁性，HepG2细胞广泛应用于肝细胞功能及病毒模型的研究。

【传代培养】对于HepG2细胞的传代，需注意以下步骤：1、当有脱落的细胞时，将培养液转移至无菌离心管中进行离心（125g，3-5分钟）以收集悬浮细胞。轻柔去除培养基后，待贴壁细胞消化后混匀接种。2、贴壁细胞用PBS洗涤1~2次，每次3-5mL，加入1mL胰酶（0.25%含EDTA），轻轻摇匀并放入培养箱中消化。3、消化完成后，将细胞悬液转移至离心管中计数并适当重悬后转入新的培养瓶中。对于T25培养瓶，可添加5-7mL完全培养基，后续每2-3天更换培养基。

【细胞冻存】在细胞密度达到80%以上且活细胞比例超过95%时，可进行冻存。用4°C的冻存液（货号：CSP042）重悬细胞沉淀，通常一瓶T25细胞冻存一管（1mL/管）。将冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，然后转移至液氮罐中保存。

【细胞复苏】从液氮中取出的细胞需迅速转移至干冰中，再放至细胞房，准备好完全培养基和离心管。冻管在37°C水浴中快速解冻（约1-2分钟），随后将内容物转移至离心管中，离心去除培养基后重悬细胞。再根据细胞密度调整至合适水平，转移至培养瓶中，并静置于培养箱中。建议在密度达到80%以上时进行传代。

【常见问题】在培养HepG2细胞过程中，细胞可能会出现一些问题：1、对细胞内黑色颗粒的处理，通常为细胞分泌的泡及细胞器折光现象，无法清除，但可通过优化培养条件减少。2、空泡现象是HepG2细胞的正常特性，不影响细胞生长，无需担心。3、生长缓慢时可适当增加血清比例，促进细胞恢复生长。4、细胞聚团或不贴壁可能与血清品牌和培养基pH值有关，应使用高质量的低内毒素胎牛血清，以促进细胞贴壁生长。5、对于漂浮细胞，通常情况下这是正常现象，需检查细胞活性并进行适当处理。

【注意事项】HepG2[HEPG2]对培养环境的要求较高，尤其是在pH值和血清质量方面。使用高质量低内毒素的胎牛血清对于细胞的贴壁及生长至关重要。值得注意的是，在复苏初期，细胞可能会有不典型的形态，但随后的传代会恢复至正常形态。我们建议使用优质的胎牛血清进行细胞培养，或选择利来国际提供的配套MEM完全培养液。此外，我们也提供HepG2无血清专用培养基，欢迎咨询和订购。

【发表过的文献】截至2024年，引用中乔新舟的文献总数为72篇，影响因子达467.07，最高影响因子为27.5，以下是一些代表性文献，可供参考。