实验准备:实验开始前半小时,将培养基、PBS和胰酶在37°C下预热。照紫外光消毒所需的器材,包括2mL和10mL的移液管、15mL的离心管及WHB品牌的共聚焦爬片。
实验步骤:
1. 观察细胞状态
从培养箱中取出培养皿,使用显微镜观察细胞状态,包括细胞密度、形态和贴壁情况。
2. 清洗细胞
在超净台内,放入预热好的培养基、PBS和胰酶。点燃酒精灯,对培养皿口进行消毒,并吸走原培养基。
加入7mL的PBS(根据细胞状态适量调整),轻轻摇匀以清洗细胞。
3. 消化细胞
在观察到杂质洗去后,吸走PBS,加入3mL的胰酶,静置5分钟(时间和量可根据不同细胞进行调整),然后观察细胞是否被消化。
4. 终止消化
如果细胞已经消化,向底部加入7mL的培养基(根据细胞密度调整),终止消化过程,并用吸管轻轻吹打多次,以将残留的细胞吹打下来。均匀后取少量进行计数。
5. 稀释细胞
根据需要进行细胞稀释,当细胞悬液滴满共聚焦爬片表面后,将其放入培养箱中,静置约30分钟,待细胞附着后,再沿内壁添加培养基,继续培养。
6. 取出支架
细胞培养完成后,吸掉废液,用镊子夹住支架的一侧,轻松取出支架。
双手捏住支架两侧轻轻拉出爬片,继续后续的培养实验。
注意事项
1. 拿取培养皿时,确保液体不接触瓶口,每次打开瓶口时必须消毒。
2. 操作时,不要有其他物体经过开放的培养皿,以避免交叉污染。
3. 由于贴壁细胞的脆弱性,将其放入培养皿中的液体务必预热至37°C。
4. 取用共聚焦爬片时,保持其倾斜角度在30°以上,轻拉以防止爬片掉落或破裂。
5. 该产品为利来国际品牌的一次性产品,不能重复使用,爬片有正反面之分,拆开后立即使用。