【慢病毒的应用场景】目前,慢病毒载体在以下几个领域得到了广泛应用:首先是细胞基因治疗,目前已上市的CAR-T产品中,有9款采用了慢病毒载体来递送CAR基因;其次,慢病毒在基因表达调控方面也有所应用,涉及过表达与RNA干扰研究等;再者,基因编辑技术中,慢病毒载体被用于CRISPR/Cas9 gRNA文库筛选、基因敲除、敲入、点突变及基因激活/抑制;此外,稳转细胞株构建和活体细胞成像追踪转基因动物也是慢病毒的重要应用方向。
【应用案例】在实验设计中,包括了针对ADPGK过表达的慢病毒结构示意图,以及相关的ADPGK过表达结果。另一项研究展示了慢病毒介导的特异性shRNA在敲低PHD2、RyR2和IP3R方面的效果。此外,研究还指出LRP1在小鼠和猪的耳蜗细胞中有广泛的表达,特别是在BLB区域和目标细胞中。通过靶向LRP1的配体肽IETP2,可以有效传递荧光染料、抗氧化药物和MRI造影剂等小分子至内耳。这显示LRP1可能成为开发非侵入性和针对性药物递送策略的有效靶点,以提升内耳疾病的治疗效果。LRP1不仅在细胞内吞作用中扮演重要角色,还通过结合IETP2肽被LRP1阳性细胞内化,且该内吞作用依赖于LRP1的表达。使用CRISPR/Cas9技术敲低LRP1基因的研究进一步验证了其在IETP2内吞中的关键作用。这些发现为制定新的治疗策略提供了基础,未来可能帮助内耳疾病的诊断和治疗。通过LRP1的介导作用,研究人员可以探索更有效的治疗药物递送方式,从而提高治疗效果,并降低副作用。
在另一个实验中,Akaluc和Fluc报告基因的设计与灵敏度进行了比较。使用表达Venus-Akaluc或Venus-Fluc融合蛋白的慢病毒载体,对人GBM细胞系U87MG和小鼠高级别胶质瘤细胞系GL261进行转导,结果显示病毒载体转导对胶质瘤细胞的增殖率没有显著影响。 A位表达Akaluc的细胞在生物发光成像(BLI)信号上比表达Fluc的细胞强大约10倍。颅内移植表达Akaluc的胶质瘤细胞产生超过Fluc 100倍的BLI信号。将GL261-Venus-Akaluc和GL261-MSCV-Fluc胶质瘤细胞颅内植入同系C57BL/6小鼠中,Venus-Akaluc组的BLI信号在各时间点均显著高于GL261-Fluc组。Akaluc BLI系统能够追踪更少数量的移植胶质瘤细胞,从而更准确模拟肿瘤发生和早期生长,并可以用于在体内对胶质瘤治疗反应的纵向追踪。
总之,Akaluc BLI为胶质瘤生长、侵袭和转移提供了一种敏感的体内追踪方法,特别适用于监测较小肿瘤的成像以及治疗后的复发情况。强烈推荐使用利来国际提供的表达Akaluc的慢病毒,以优化生物医学研究及治疗方案。